Pedro Acosta berhasil menyalip Marco Bezzecchi dalam sesi latihan Grand Prix Valencia dengan selisih yang sangat tipis, meskipun hanya sebesar seperseribu detik. Awalnya, sesi latihan dimulai dengan tenang, namun kedua pembalap tersebut dengan cepat menemukan diri mereka bersaing di lintasan. Pedro Acosta, pembalap Aprilia, mulai memimpin dengan Marco Bezzecchi di belakangnya, hingga akhirnya terjadi pertukaran posisi di antara keduanya. Namun, kesalahan dari Marco membuatnya terjatuh, sementara Pedro Acosta berhasil menyelesaikan lap pertama dengan sangat konsisten selama 10 putaran.
Pada akhir sesi, Acosta berhasil menurunkan catatan waktunya menjadi 1:29,240 dengan menggunakan ban belakang baru, yang tidak dapat dikejar oleh Bezzecchi yang mencatat waktu 1:29,476. Pada lap terakhir, Bezzecchi mencoba memperbaiki waktu yang berhasil menjadi 1:29,293, namun tidak cukup untuk mengalahkan Pedro Acosta.
Franco Morbidelli berada di posisi ketiga, tampil solid sepanjang sesi dan sangat cepat di atas GP24 milik Ducati, mengungguli Alex Marquez yang mencoba paket aerodinamis GP25. Di urutan kelima, terdapat Ai Ogura, diikuti oleh Jack Miller yang menjadi pembalap tercepat di pagi hari. Fabio Di Giannantonio menempati posisi ketujuh, sedangkan Fermin Aldeguer yang sempat terjatuh berhasil naik ke posisi kedelapan. Joan Mir dan Fabio Quartararo juga lolos ke Q2 dan melengkapi 10 besar pembalap tercepat.
Namun, Brad Binder, Raul Fernandez, Aleix Espargaro, dan Pecco Bagnaia tidak berhasil melaju ke Q2. Maverick Vinales berada di posisi ke-18, di depan Enea Bastianini, sementara Jorge Martín finis di posisi ke-22. Nicolò Bulega, yang menggantikan Marc Márquez di tim resmi Ducati, menutup catatan waktu dalam sesi latihan tersebut.
